SIEX - Sistema de Informações de Extensão

Plano de ensino: Não se aplica.

Objetivos e Resultados Esperados: O objetivo deste curso é fornecer uma visão geral da técnica de Western Blotting, proporcionando aos(às) alunos(as) um entendimento melhor de como é o funcionamento de cada etapa e o que pode ser otimizado, em caso de problemas.

Justificativas: A necessidade do curso se justifica pelo fato de ser uma técnica relativamente simples, mas com muitos passos e com possibilidades de problemas em vários deles. Apesar de ser simples, é uma técnica muito robusta, com mais de 20 anos sendo aplicada, e ainda muito utilizada por seu resultado bastante expressivo e importante, pois avalia a possível variação na quantidade de determinada proteína e/ou as alterações pós-traducionais que possam ter ocorrido. A ideia é fornecer um embasamento para que os(as) alunos(as) ou outras pessoas que utilizam a técnica possam ter mais conhecimento e consigam otimizar o seu protocolo, já que para cada anticorpo que utilizamos podem ser necessários ajustes para melhores resultados.

Metodologias: Serão apresentadas aulas teóricas, com auxilio de recursos audiovisuais, abordando os conceitos básicos, as aplicações e análise dos dados.

Conteúdo programático com responsáveis pedagógicos por tema/assunto - aula ou grupo de aulas: Título: Desvendando o Western Blotting: do conceito à bancada. Manhã (4 horas) Módulo 1: Introdução e Fundamentos (2 horas) Histórico e evolução do Western Blotting. Princípios detalhados da técnica: Eletroforese SDS-PAGE: teoria, géis, inibidores, tampões e aplicações. Transferência de proteínas: tipos de membranas, mecanismos e otimização. Imunodetecção: anticorpos primários e secundários, bloqueio e sistemas de detecção. Aplicações do Western Blotting em pesquisa básica e clínica. Módulo 2: Componentes e Reagentes (2 horas) Géis de poliacrilamida: preparação, composição e otimização. Membranas de transferência: tipos, características e seleção. Anticorpos: tipos, produção, especificidade e diluição. Sistemas de detecção: quimioluminescência, fluorescência e outros. Soluções e tampões: preparo, armazenamento e importância. Tarde (4 horas) Módulo 3: Análise e Interpretação de Resultados (2 horas) Controles experimentais: positivos, negativos e internos. Quantificação de proteínas: métodos e software de análise. Interpretação de bandas: tamanho molecular, intensidade e especificidade. Análise estatística de dados de Western Blotting. Módulo 4: Solução de Problemas e Otimização (2 horas) Problemas comuns no Western Blotting: causas e soluções. Sessão de perguntas e respostas e discussão final.

Referências (bibliográficas e outras): Serão utilizados artigos científicos descrevendo a técnica e com a sua aplicação. Além disso, serão apresentados manuais de empresas produtoras de anticorpos, de reconhecimento nacional e internacional, que oferecem o material gratuitamente na internet. Análises de RNA, Proteínas e Metabólitos - Metodologia e Procedimentos Verlengia, Rozangela; Curi, Rui; Bevilacqua, Estela; Newsholme, Philip. São Paulo; Santos; 2013. 454 p. Cell Signaling - eBook: A Guide to Successful Western Blotting Abcam - The western blot guide to help you progress faster

Modo e critérios da avaliação de aproveitamento: O aproveitamento será avaliado de acordo com a participação dos(as) alunos(as) e pela presença no curso.

Estratégias de Divulgação: Será divulgado pelo site da Proec, na parte dos cursos, e pela página inicial do Campus Diadema da Unifesp, além de redes sociais.

Recursos didáticos: Serão ministradas aulas com auxílio audiovisual, incentivando muito a participação dos(as) alunos(as), especialmente com relação às dúvidas dos(as) que já utilizam a técnica.

Ementa: Módulo 1: Histórico e evolução do Western Blotting. Princípios detalhados da técnica (Eletrofores, transferência de proteínas e imunodetecção). Aplicações do Western Blotting em pesquisa básica e clínica. Módulo 2: Componentes e Reagentes (géis, membranas, anticorpos, soluções e tampões). Módulo 3: Análise e Interpretação de Resultados (Controles, quantificação de proteínas, interpretação das bandas e análise dos resultados). Módulo 4: Solução de Problemas e Otimização. Sessão de perguntas e respostas e discussão final.